URA3

URA3 — ген на V-й хромосоме дрожжей Saccharomyces cerevisiae. Его систематическое название — YEL021W. URA3 часто используется в молекулярно-биологических исследованиях дрожжей как маркёрный ген (ген, при помощи которого помечают участки хромосом или плазмиды). Он кодирует оротодин-5'-фосфатдекарбоксилазу, фермент, который катализирует одну из реакций синтеза пиримидиновых рибонуклеотидов (мономеров РНК)[1].

Использование

Утрата активности оротодин-5'-фосфатдекарбоксилазы приводит к остановке клеточного роста. Такие клетки растут только на среде, в которую добавлен урацил или уридин. Если же в результате трансформации у дрожжей появляется ген URA3, то происходит восстановление активности фермента, в результате чего клетки вновь могут расти на среде без урацила или уридина. Такой механизм позволяет осуществлять положительную селекцию клеток, несущих этот ген. Если же к культуре таких дрожжей добавить 5-ФОК (5-фтороротовая кислота), то активная оротодин-5'-фосфатдекарбоксилаза преобразует 5-фтороротовую кислоту в токсичное соединение 5-фторурацил, что приводит к смерти клетки. Это позволяет вести селекцию против дрожжевых клеток, несущих этот ген.

Поскольку ген URA3 позволяет осуществлять как положительную, так и отрицательную селекцию, он широко используется как генетический маркёр трансформации ДНК во многих генетических и молекулярно-биологических техниках для бактерий и многих видов грибов. Это один из самых важных генетических маркёров дрожжей. Хотя ген URA3 и позволяет осуществлять эффективную и удобную селекцию, он всё же обладает существенных недостатком. Основной недостаток заключается в том, что клетки, накопившие достаточно мутаций в гене URA3 могут расти на среде с 5-ФОК. Перед использованием вновь созданного штамма, его следует проверить вторым методом, таким как ПЦР, что бы убедится, что он действительно обладает желаемыми свойствами.

Внешние ссылки

S. cerevisiae database (2005) URA3 gene. https://web.archive.org/web/20080604040222/http://db.yeastgenome.org/cgi-bin/locus.pl?locus=ura3#summaryParagraph (accessed 16/10/07).

Примечания

  1. Flynn, P. J.; Reece, R. J. Activation of transcription by metabolic intermediates of the pyrimidine biosynthetic pathway (англ.) // Molecular and cellular biology : journal. — 1999. — Vol. 19, no. 1. — P. 882—888. — PMID 9858611. — PMC 83945.

Content Disclaimer

Informasi ini disarikan dari Wikipedia dan disajikan kembali untuk tujuan edukasi. Konten tersedia di bawah lisensi CC BY-SA 3.0. Kami tidak bertanggung jawab atas ketidakakuratan data yang bersumber dari kontribusi publik tersebut.

  1. The information displayed on this website is sourced in part or in whole from Wikipedia and has been adapted for the purpose of restating it. We strive to provide accurate and relevant information, however:
  2. There is no guarantee of absolute accuracy. Wikipedia is an open, collaborative project that can be edited by anyone, so information is subject to change.
  3. It is not intended to constitute professional advice. The content displayed is for informational and educational purposes only. For important decisions (e.g., medical, legal, or financial), please consult a professional.
  4. Content copyright. Wikipedia is licensed under the Creative Commons Attribution-ShareAlike License (CC BY-SA). This means that content may be reused with appropriate attribution and shared under a similar license.
  5. Responsible use. Any risk arising from the use of information from this website is entirely the responsibility of the user.